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落射荧光显微镜在使用前要做好的检查工作
点击次数:99 发布时间:2019-01-23
   落射荧光显微镜在使用前要做好的检查工作
  落射荧光显微镜利用荧光显微技术,配置了B、G二组激发组,配置大视野目镜和平场消色差与荧光物镜,视场大而且清晰。在显微镜上观察标本的荧光现象具有极高的敏感度,可以清楚地观察和鉴定用普通显微技术难以观察到的染色体标本,作为一种研究方法或实验手段,广泛应用于生物和医学等技术领域中。这款显微镜是近代才发展起来的新式显微镜。与旧式显微镜的不同之处是激发光从物镜向下落射到标本表面,即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。在整个光路的中还需要载加入一个分离器,激发光被反射到物镜中,并聚集在样品上这款新式的显微镜提供的功能,可满足不同荧光反应产物的需要,因此落射荧光显微镜被应用在了更广的范围内。适用荧光显微技术和明视场观察,是生物学、细胞学、肿瘤学、遗传学、免疫学等研究工作的理想仪器。
  这次落射荧光显微镜除了在产品上取得突破以外,在应用方案上,中科院也开发出了一套用于分析成像数据的程序包,彻底打通了产品从开发与实际应用之间的壁垒。通过对样本进行紫外线照射,使样本产生荧光(部分不会产生硬广告的物质需要用荧光染料染色),以方便研究样本内细胞的结构。因此,从组成部分来看,除了具有一般显微镜具有的物镜、目镜以外,还包括有紫外线光源、物镜与目镜之间过滤紫外线以保护人眼的滤光片等。
  落射荧光显微镜以短光波的紫外光线为光源,观察的标本多用荧光色素染色,由于紫外线的照射,激发标本内的荧光物质,而呈现可见的荧光映像。因落射荧光显微镜的光源波长短,具有超出传统显微镜分辨率极限的高分辨率,且能够直接显示标记微量荧光抗体等生物化学成分,在免疫学和临床诊断方面具有其他技术方法难以比拟的作用。
  落射荧光显微镜的预检查和调节:
  (1)每次进行荧光观测前,必须例行检查荧光装置的灯丝对中、光路对焦、孔径光阑、视场光阑设置等状况。
  (2)所需要的荧光激发/发射滤光片组件是否已装在转换器中,物镜配置是否得当,除去物镜前透镜的油渍和灰尘。
  (3)如同时进行透射光相差观察,要检查聚光镜对中心及相差环与物镜相反的共轭情况。
  (4)检查样品载体(载玻片、盖玻片和其他器皿)有否挂有液体、灰尘,厚度是否在物镜标定的工作距离范围内。切片样品不能太厚,约≤10μm为宜。
  (5)因照明光源含有紫外线,在载物台前上方放一块棕色遮光板,以防紫外线损伤视网膜。
  (6)电压不稳会降低高压汞灯的使用寿命,光源电源加配稳压器。
  (7)为延长汞灯寿命,在开启后15min方可关闭;汞灯荧光电源一旦关闭,再次启动至少需等待10min,以使水银蒸汽冷却复至原态,否则会影响落射荧光显微镜的寿命。
 
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